ערכת בדיקת חומצת גרעין SARS-CoV-2

שימוש מיועד:

ערכת בדיקת חומצת גרעין SARS-CoV-2 מיושמת על זיהוי איכותי של חומצת גרעין של COVID-19 במטושים של האף-לוע, ספוגיות הלוע וכיח. תוצאות הבדיקה מספקות בסיס לאבחון מולקולרי לזיהום או לחולים חשודים, ואין להשתמש בהן כקריטריון היחיד לאבחון קליני.

חומרים:

נוהל הבדיקה:

א. הכנה לדוגמה

RNA מופק הוא חומר המוצא לערכת בדיקת חומצות גרעין SARS-CoV-2.

חשוב: כל הליך מיצוי של חומצת גרעין חייב להתבצע בו זמנית עם שליטה חיובית אחת (40 μL, דילול עם תמיסות מלח סטריליות / PBS לנפח הרצוי) ובקרה שלילית אחת (40 μL, מדולל עם תמיסות מלח סטריליות / PBS לנפח הרצוי).

מומלץ להשתמש בערכות המיצוי המסחריות הבאות של חומצות גרעין: ערכת RNA/DNA Mini של PureLinkTM נגיפית (Invitrogen); ערכת RNA מיני ויראלית (QIAGEN); ערכת Hi-DNA/RNA של TIANamp (טיאנג'ן);

ב. הגדרת תמהיל תגובות

1. יש להפשיר את כל הריאגנטים והדגימות לחלוטין, לערבב אותם לחלוטין ולעבור צנטריפוגות לזמן קצר בטמפרטורת החדר (טווח משוער של 18 עד 25 מעלות צלזיוס) לפני השימוש.

2. הכינו את הנפח הנדרש של תערובת התגובה בצינור מיקרוצנטריפוג' פוליפרופילן בגודל מתאים.

3. פיפט 25 μL של תערובת התגובה לתוך כל באר נדרשת של לוחית תגובה אופטית מתאימה של 96 קידוחים או צינור תגובה אופטי מתאים.

ג. הוספת תבנית

1. הוסף 5 μL של RNA שחולץ מדגימות / שליטה חיובית / שליטה שלילית. הנפח הכולל הוא 30 μL.

2. ערבבו היטב את הדגימות והבקרות עם תערובת התגובה על ידי צנרת למעלה ולמטה/וורטקס.

3. סגור את לוחית התגובה של 96 הבאר עם מכסים מתאימים או סרט דבק אופטי ואת צינורות התגובה עם המכסים המתאימים.

4. צנטריפוגה לוחית התגובה של 96 קידוחים בצנטריפוגה עם רוטור לוחית מיקרוטיטר למשך 30 שניות בערך 2500 סל"ד.

ד. תכנות מכשיר ה-PCR בזמן אמת

לקבלת מידע בסיסי בנוגע להתקנה ולתכנות של מכשירי ה-PCR השונים בזמן אמת, עיין במדריך למשתמש של המכשיר המתאים. הבדיקה עברה אופטימיזציה עבור מערכת ה-PCR בזמן אמת ABI7500. ריצת ה- PCR מתבצעת עם תנאי רכיבה על אופניים כמתואר בטבלה שלהלן.

הגדרת גלאי הפלואורסצנציה

*אנא הגדר את ההתייחסות הפנימית הפלואורסצנטית של המכשיר ל-"None", לדוגמה: עבור מכשירים מסדרת ABI הגדר את "הפניה פסיבית" ל-"None".

ה. ניתוח נתונים

אנא הגדר את פרמטרי הניתוח ונתח את הנתונים בהתאם להוראות ההפעלה של המכשירים הרלוונטיים.

קחו לדוגמה את ABI 7500:

יש להגדיר את קו הבסיס לטווח שמבטל את הפלואורסצנציה ברקע שנמצאה במחזורים המוקדמים של ההגברה, אך אינו חופף את האזור שבו אותות הגברה עולים מעל הרקע (ערך התחלה:3~10; ערך סיום: 10-20). סף המחזור (Ct) צריך להיות בבסיס הפאזה האקספוננציאלית. לחץ על "ניתוח" כדי לקבל את תוצאת הניתוח באופן אוטומטי, וקרא את תוצאת הזיהוי בחלון "דוח".

תגיות פופולריות: ערכת בדיקת חומצות גרעין של sars-cov-2, סין, ספקים, יצרנים, מפעל, בתפזורת